細(xì)胞株通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱(chēng)為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱(chēng)為有限細(xì)胞株；如果可以連續(xù)傳代，稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞株。對(duì)于人類(lèi)腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長(zhǎng)穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱(chēng)為連續(xù)性株或系。

　　細(xì)胞株的建株實(shí)例講解：

　　一、腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)

　　1.取材：材料主要來(lái)源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時(shí)避免用壞死組織，要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

　　2.成纖維細(xì)胞排除：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長(zhǎng)，并常壓過(guò)癌細(xì)胞，導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)受阻以至消失，應(yīng)仔細(xì)排除。

　　排除方法常有：機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

　　3.提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率

　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。一般當(dāng)腫瘤組成或細(xì)胞被原代培養(yǎng)后，要經(jīng)過(guò)對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子，根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如胰島素、雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。

　　二、人類(lèi)淋巴母細(xì)胞建株方法

　　1.取4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。

　　2.混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min。

　　3.1500rpm，15min，吸取白細(xì)胞層于另一離心管中。

　　4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次。

　　5.將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻。

　　6.水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。

　　7.1500rpm，15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。

　　8.五天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況，決定是否半量換液。一般半量換液1-2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。

　　9.待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加1-2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10-15天，一般每隔3-4天觀察一次，決定是否換液，傳代。

　　10.細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存，凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。

上一篇 : 淺談腫瘤細(xì)胞的“復(fù)制”及可能引發(fā)的反應(yīng)    下一篇 :  【展會(huì)回顧】第三屆現(xiàn)代臨床分子診斷論壇

>> 返回首頁(yè)