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細胞株入門知識講解

原載自:www.bchzp.com[行情動態(tài)]  2021-06-25  瀏覽次數(shù):1423

   細胞系、細胞株、原代細胞這三者有何區(qū)別。
  原代細胞
  用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說,從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞,絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關),再加上取材,成本等因素,通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
  細胞系
  原代細胞一般傳至10代左右,大部分細胞衰老死亡,但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,存活的細胞一般能夠傳到40-50代,叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機”,這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c,從而可能無限制地傳代下去,稱為細胞系。
  也有認為細胞系(cell line)指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系(Finite Cell Line)、無限細胞系(Infinite Cell Line),因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞,廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株(Cell Strain)。
  細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點,也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
  動物細胞是生產(chǎn)治療性重組蛋白的強有力工具。為與小分子藥物區(qū)別開來,治療性蛋白、疫苗以及細胞治療產(chǎn)品統(tǒng)稱為生物制品。宿主細胞的選擇和改造對于提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質量來說至關重要。因此必須對細胞進行篩選,選出具有高表達量和良好生長特性的細胞。在此我們主要討論適用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的細胞株的篩選。
  工業(yè)上重組蛋白的制備主要有兩種方式:瞬時轉染和穩(wěn)定轉染。瞬時轉染經(jīng)常用于制備少量蛋白(多達克級)用于藥物開發(fā)早期的蛋白活性或動物實驗。瞬時轉染并不產(chǎn)生克隆細胞株,它只是暫時將編碼外源蛋白的質粒轉導入已有的細胞株里面(比如HEK293或COS細胞)。隨著細胞的分裂外源基因不斷丟失,蛋白產(chǎn)量較低,一般在1-100mg/L。近年來有報道稱HEK293細胞中瞬時表達產(chǎn)量可達1g/L。
  與瞬時轉染不同,穩(wěn)定細胞株是為工業(yè)化生產(chǎn)治療性蛋白而構建的。穩(wěn)定細胞株需要具備在不同的時間,不同的場地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用細胞株之后,需要建立主細胞庫(mater cell bank)。從主細胞庫復蘇后,擴增建立工作細胞庫(working cell bank),工作細胞庫用于生產(chǎn)。細胞庫通常保存在液氮中,需要維持整個產(chǎn)品的生命周期。在構建生產(chǎn)用細胞株的過程中,宿主細胞和表達載體至關重要。

 

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