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ATCC細胞接收操作

原載自:www.bchzp.com[行情動態(tài)]  2017-12-11  瀏覽次數(shù):1488

   ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
  ATCC細胞接收操作:
  1.由于細胞運輸途中存在較多不可控因素(如溫度變化,強烈振蕩,時間較長,生長條件不適宜),可能出現(xiàn)漏液,污染,細胞漂浮及死亡等狀況,因此請務(wù)必在收到細胞當天提供原始細胞圖片。
  圖片拍攝步驟:收到細胞快遞當日必須先著重對培養(yǎng)基拍*組照片,觀察是否有漏液和培養(yǎng)基是否顏色變渾濁,是否變異常,并顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張,拍攝照片應(yīng)清晰;第二組照片,未開瓶蓋、未做任何處理把細胞培養(yǎng)瓶靜置在培養(yǎng)箱2--4h后進行拍攝;第三組照片,細胞*次傳代后,如果細胞有問題,要每天都有照片記錄下來提供給甲方。
  根據(jù)提供的圖片,本公司技術(shù)人員分析細胞確有問題,承諾免費提供一次;若未在規(guī)定時間限制內(nèi)提供相關(guān)圖片,默認收到細胞時細胞正常。
  2.由于運輸過程中的問題,細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,培養(yǎng)3天,3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡,請?zhí)峁┘毎麍D片跟進解決。(這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況,如果原來FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度)
  3.收到細胞時若無以上兩種異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,若為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液吸出,留5ml左右培養(yǎng)基(T25細胞培養(yǎng)瓶)繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按照細胞培養(yǎng)條件進行傳代培養(yǎng)。
  4.收到細胞,原瓶中的培養(yǎng)液若顏色正常,可以收集繼續(xù)使用,在*次消化傳瓶時,建議留一瓶細胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液,其他瓶的細胞可使用客戶自己的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),這樣可以減少由于細胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的問題,請按照細胞處理方法進行操作。
  ATCC細胞株配制注意事項
  1.細胞株經(jīng)滅菌后,必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h,無菌生長者方可使用。
  2.ATCC細胞株一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的細胞株,一般用pH試紙測定其pH。如果細胞株偏酸或偏堿時,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過酸或過堿破壞細胞株成分。
  3.細胞株在使用時也可以做成不含瓊脂的液體細胞株,用于菌類的震蕩培養(yǎng)。
  4.ATCC細胞株也可以加入氯霉素或土霉素,加入量為0.2g/L細胞株,主要是為了抑制細菌的生長,減少干擾性。

 

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